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全自動(dòng)核酸純化儀純化核酸的步驟

更新時(shí)間:2021-08-05瀏覽:1030次
   全自動(dòng)核酸純化儀選用磁棒吸附搬運(yùn)核酸純化方式,使用深孔反應(yīng)板和磁棒套,搭配不同品種的磁珠法核酸提取試劑,一起操作1-96個(gè)樣本,從血液、細(xì)胞、安排、病毒等多種樣本中自動(dòng)分離提取純化DNA/RNA。儀器經(jīng)過特制的磁棒吸附、搬運(yùn)和釋放磁珠,然后完結(jié)樣本/磁珠/核酸的搬運(yùn),避免了液體處理進(jìn)程,提高了自動(dòng)化程度。
 
  全自動(dòng)核酸純化儀在裂解液裂解樣本后,游離于裂解/結(jié)合液中的核酸被磁珠特異性吸附,經(jīng)過磁棒及磁棒套配合,完結(jié)磁吸、搬運(yùn)、釋放和混合等動(dòng)作使吸附核酸的磁珠與裂解/結(jié)合液分離,并在漂洗液孔將與磁珠非特異結(jié)合的各種雜質(zhì)去除,后使核酸分子溶解于洗脫液中。
 
  全自動(dòng)核酸純化儀在分子克隆的所有操作中,基本的操作是核酸的純化。其關(guān)鍵過程是去蛋白質(zhì),通常只要用酚/氯仿。氯仿抽提核酸的溶液即可。每當(dāng)需要把克隆有某一些所用的酶滅活或去除以便進(jìn)行下一步時(shí),可進(jìn)行這種抽提。但是,如要從細(xì)胞裂解液等復(fù)雜的分子混合物中純化核酸,則要先用某些蛋白水解酶消化大部分蛋白質(zhì)后,再用有機(jī)溶劑抽提。
 
  這些蛋白酶包含鏈霉蛋白酶及蛋白酶K等,它們對(duì)多種天然蛋白均有活性,用酚氯仿抽提:這兩種有機(jī)溶劑合用,比單獨(dú)用酚抽提的除蛋白作用更佳。繼而用氯仿抽提則可除掉核酸制品中的痕量酚。
 
  1.核酸樣品置有蓋小離心管中,加入等體積的酚/氯仿。
 
  2.旋渦混勻管內(nèi)容物,使呈乳狀。
 
  3.12000×g室溫離心15秒。
 
  4.水相移入另一離心管,棄去兩相界面和有機(jī)相。
 
  5.重復(fù)過程1-4步操作,直至兩相界面上見不到蛋白質(zhì)停止
 
  6.按下述核酸濃縮法沉淀收回核酸。

聯(lián)系電話:
020-39921409

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