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光片掃描顯微鏡比共聚焦激光掃描顯微鏡好在哪?

更新時間:2021-07-27瀏覽:1125次
   光片掃描顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)是結(jié)合了兩條相互正交的不同光路,一條用于快速寬視場的檢測,另一條通過一片薄光片用于照明。一般來說,光片處于檢測路徑的焦平面上,光片的束腰處于視野的中心。
 
  光片掃描顯微鏡利用照明與檢測物鏡相互正交,樣品置于兩個物鏡焦平面的相交處,樣品的其中一小片會被一片薄薄的激光光片所照亮。光片束腰應(yīng)在視野的中心位置且與檢測路徑的焦平面*重合。
 
  光片照明
 
  選擇平面照明顯微鏡的特殊結(jié)構(gòu)解決了單鏡頭結(jié)構(gòu)的兩條基本限制:
 
  1、在低數(shù)值孔徑(NA)的物鏡中獲得很薄的光學(xué)切面是非常困難的;
 
  2、在對樣品的單個區(qū)域進(jìn)行成像時整個樣品都處于被激光照亮的狀態(tài),這會增加數(shù)倍熒光漂白和光毒性的可能:在獲取樣品的N個平面信息的同時,每個平面都在激光下曝光了N次。
 
  相比之下,在SPIM中,只有檢測物鏡的焦平面被選擇性地照亮,這能有效使得樣品接收的激光能量輸入減少。在獲取N個平面的信息時每個平面也只會曝光一次。光片的厚度決定了軸向光學(xué)切面(XY面)的厚度,然而SPIM的光片厚度比普通顯微鏡技術(shù)中檢測物鏡的景深要薄得多。因此,通過光片顯微鏡,我們可以在大樣本中獲得大視場且薄的光學(xué)切片。
 
  與共聚焦激光掃描顯微鏡相比,光片掃描顯微鏡有許多顯著優(yōu)勢:
 
  1、在使用共聚焦顯微鏡時,即使只成像單個平面,整個樣品也會被均勻得被激光照亮;
 
  2、在使用光片顯微鏡時只有檢測的目標(biāo)平面才會被選擇性地照亮;
 
  3、在使用共聚焦顯微鏡時,激光檢測點需要掃遍整個樣本后獲得一張圖像;
 
  4、在使用光片顯微鏡時,整個視野范圍同時檢測從而可以在短時間內(nèi)獲得一張圖像;
 
  5、在光片顯微鏡的橫向分辨率與寬場熒光顯微鏡相同時,因為光片照明技術(shù),光片顯微鏡的軸向分辨率會顯著提升(在10×/0.3的鏡頭下,分別可以達(dá)到共聚焦顯微鏡與寬場熒光顯微鏡的2倍與2.5倍)。

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020-39921409

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